脑组织属于多脂质特殊组织,建议用液氮研磨组织,用强力的蛋白提取液提取蛋白,防止蛋白降解(全程冰上操作,蛋白提取液要预先预冷。不要4℃放置太长时间)。在4℃旋转混合仪上进行充分裂解30min,裂解液要充分离心4℃,15000rpm,30min。小心的避开脂质层,取上清再加足量或者过量的Laemmli buffer,95℃,20min加热变性,如果看不见明显的脂质层,可以将离心时间延长至60min。 核蛋白和膜蛋白,这类蛋白的内源性表达量大部分较低,需通过专门的提取方式进行富集,然后裂解得到待测样本,这种类型蛋白的提取Kit商业应用已经很成熟,国内可供选择的品牌也很多。
二抗,又名“secondary antibody”,常出现在需要使用一抗的免疫实验中。 按照功能可分为常规标记二抗和荧光二抗两种。二抗的结合对象为一抗,其以一抗本身 (如兔IgG)为靶标,通常在产品名称中用类似“Goat Anti-Rabbit(即山羊抗兔)”来标识靶标识别关系。以“Goat Anti-Rabbit(即山羊抗兔)”为例,“Goat-山羊”为二抗的抗体来源种属(即“宿主”),“Rabbit-兔”为二抗所要结合的一抗的抗体来源种属。 当某一免疫反应体系中的一抗来源为“Mouse-小鼠”时,即可选用“Goat Anti-Mouse”或“Rabbit Anti-Mouse”等二抗来完成反应。 二抗与一抗的抗体来源种属,应保持不同,以避免抗体内自相反应。
具体储存建议以产品说明书及产品标签为准。
1.一般情况下,浓缩抗体可以在2-8°C条件下储存12周
2.为延长抗体使用期限,建议客户收到抗体后立即冻存于-20°C冰箱(50%甘油的凝固点为-24°C)
3.长期储存,建议将抗体分装保存在温度设置更低的冰箱中(分裝目的是为了减少反复冻融对抗体活性的损害,同时避免多次从同-管中吸取抗体造成污染)。