什么是蛋白标签

‌蛋白标签‌是指在基因工程中通过基因重组技术在目标蛋白质的N端或C端附加上特定的氨基酸序列。这些标签通常由几个到几十个氨基酸组成，用于增加目的蛋白的溶解性、便于检测、纯化和定位。

什么是标签抗体

‌标签抗体‌是指能够与重组蛋白上的标签特异性结合的抗体。这些抗体通过抗原-抗体相互作用的原理，特异性结合对应的标签融合蛋白，主要用于检测和纯化各种商品化的表达载体的标签序列。标签抗体在免疫印迹、免疫细胞化学、共免疫沉淀、流式细胞术、蛋白质纯化、蛋白质相互作用、细胞超结构和蛋白质定位研究中发挥重要作用‌。

蛋白标签的分类及意义

常见蛋白标签通常分为三类，包括亲和标签、表位标签和荧光标签。

①亲和标签 是指在重组蛋白的N端或C端添加的一段短肽，主要用于促进表达蛋白的纯化。这些标签通常包含几个到几百个氨基酸，不仅有助于目标蛋白的分离和纯化，还可以提供其他功能，如促进目标蛋白的检测或改善目标重组蛋白的溶解性‌等，广泛应用于重组蛋白的纯化，如His、GST、MBP、Strep-tag II等。

②表位标签 表位标签往往是短肽序列，可以通过特定的抗体与表位结合，实现对目标蛋白质的精准定位和检测。它们在免疫沉淀（IP）、Western Blotting（WB）、免疫荧光（IF）和染色质免疫沉淀（ChIP）等应用中发挥着重要作用‌。最常用的表位标签有HA、Myc、Flag、V5、VSV-G等。

③荧光标签 荧光标签可用于活细胞和死细胞检测，最常用的荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（GFP）、橙色荧光蛋白（OFP）、红色荧光蛋白（RFP）和黄色荧光蛋白（YFP）。它们被广泛用于影像学研究，如细胞定位和共表达实验。

常用标签介绍

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Flag tag

Flag tag是一段由8个氨基酸残基组成的, N-DYKDDDDK-C (1.012 kDa), 其作用是标记标签。在蛋白表达和定位研究中, 可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和Flag tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端，然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞抑或受精卵中。后续检测主要通过Flag tag这段肽链形成的免疫决定簇与其单克隆抗体的特异性结合来实现. 检测手段有免疫荧光(immunofluorescence), 免疫印记(Western Blotting)等。

02

HA tag

HA tag是一种广泛应用的蛋白质标签，其序列YPYDVPDYA源自流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇，仅由9个氨基酸组成。这种标签对外源靶蛋白的空间结构影响较小，因此在生物研究中具有很高的实用性。
HA标签蛋白可以通过融合到外源蛋白的N端或C端，方便地构建标签蛋白，为蛋白质的功能研究和表达提供了便利。通过抗HA tag抗体，能够高效地检测和定位目标蛋白，同时ELISA检测方法也可以用于定量分析。
HA标签蛋白的应用范围广泛，例如在蛋白质纯化、细胞定位、免疫印迹以及细胞内蛋白质相互作用的研究中，都能够发挥重要作用。该标签不仅易于操作，还能够与多种下游技术兼容，使得研究过程更加高效。

03

His tag

His tag也称为多组氨酸标签，由6到10个连续的组氨酸残基组成，最常用的形式是6xHis标签，其分子量为0.8 kDa‌1。His tag主要用于重组蛋白的纯化，通过与固定化金属离子亲和层析（IMAC）技术实现蛋白的分离和纯化。His tag的设计初衷是为了提供一个简单、高效的蛋白纯化方法。组氨酸残基能够与固定在树脂上的过渡金属离子（如Ni²⁺、Co²⁺）形成配位键，从而特异性地结合目标蛋白，而其他杂质蛋白则无法结合或仅能微弱结合‌。

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GST tag

GST tag是一种由约238个氨基酸组成的蛋白质，能够在蓝光到紫外光的激发下发出绿色荧光，且不需要额外添加底物或辅因子。GFP的荧光特性使其成为一种强大的研究工具，能够用于标记和可视化目标蛋白在细胞内的定位和动态变化‌。

GFP标签常用于观察蛋白质在细胞内的位置和移动情况，帮助研究人员了解蛋白质的分布和运动规律‌。通过将GFP基因与目标基因融合，可以在细胞内实时监测基因的表达情况‌。GFP标签可以用于研究蛋白质之间的相互作用，通过荧光共振能量转移（FRET）等技术分析蛋白质的相互作用网络‌。

总结

蛋白标签以及标签抗体的选择需要考虑以下几个方面：

①根据目的蛋白的特性和需求去选择适合的标签。

②标签的位置可能影响蛋白功能和表达，如N端标签可能干扰信号肽；C端标签可能影响蛋白折叠等。

③选择高特异性的抗体，避免标签和标签抗体结合不特异，影响实验结果判读。高特异性标签抗体也可以减少抗体与样品中其他蛋白发生交叉反应的风险。

最后，戴格生物开发出覆盖多靶标、多种属来源的优质标签抗体，为您提供高质量的科研检测工具。