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支原体相关小知识及检测

发布时间:2023-05-11 09:14:00

支原体(Mycoplasma)是分类上介于细菌和病毒之间的一类微生物,支原体的种类繁多、分布广泛,目前发现的支原体品种已有100多种。支原体造成的危害相当大,涉及人、动物、植物及昆虫等多个领域,给人类健康和科研工作带来不利影响。由于支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察的特征变化,故在疫苗生产与细胞培养科研中,应该高度重视支原体的污染检测。

支原体的生物学特性

1.是目前发现的最小细胞,直径约为0.13-0.18um

2.无细胞壁,不能维持固体形态,变形能力大

3.革兰氏染色不易着色或呈阴性

4.多数支原体适合在偏碱性条件下生存,对酸耐受性差

5.对热比较敏感,对一般抗生素不敏感

支原体污染容易被忽视

1)培养液可不发生浑浊,容易忽略

2)细胞病理变化轻微或不显著

3)细微变化也可由于传代,换液而缓解

支原体污染对细胞的影响

1.影响细胞的生长状态及形态

支原体可使培养液中支持细胞生长的营养物含量减少,造成细胞生长缓慢甚至停止;另外还会引起细胞一系列病变,表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。

2. 影响细胞的代谢和功能

① 培养液中的精氨酸被支原体大量消耗,引起细胞蛋白质、核酸的合成障碍;

② 支原体活动使培养液成分发生改变,影响细胞代谢;

③ 支原体吸附在细胞表面,破坏细胞膜的完整性,影响细胞信号传递。

应对支原体污染的策略

1. 细胞一旦发生了支原体污染,应当尽早丢弃,虽然已有了针对支原体的抗生素及最近出现的所谓支原体清除剂,这些方法只能杀灭细胞外的支原体。

2. 除非是不可替代或无法重新获得的细胞,否则一般没有必要进行支原体清除工作。

3. 定期对实验室中的培养物进行支原体检测。这也是国外一些重要实验室的经验。一旦发现已出现污染支原体的培养物,灭活后丢弃。更换新的培养物,避免支原体的进一步扩散。

检测方法

优点

缺点

直接培养法

相对可靠的志愿检测技术,也是我国药典认可的方法之一

1.培养时间长,需要数周;

2.固体培养法无法检测一种常见的猪鼻支原体

酶联免疫法

  1. 支原体识别率高,100多种
  2. 可以区别支原体的死活;
  3. 不存在假阳性和假阴性;
  4. 检测时间短

需要用到具有发光检测功能的多功能酶标仪或独立的发光检测仪

DNA荧光染色法

荧光染色法也是我国药典认可的方法之一

  1. 灵敏度太低;
  2. 需要专门的指示细胞(VERO);
  3. 依赖实验室人员的经验

RD-RCA恒温扩增

  1. 整个检测过程只需1小时;
  2. 不需要样品处理;
  3. 灵敏度高;
  4. .无需电泳

只能保证最常见的污染细胞的13种支原体

PCR扩增法

  1. 快速,只需几个小时;
  2. 可检测的支原体种类较多;
  3. 支原体污染检测的常规方法之一
  1. 样品处理;
  2. 需要用到各类仪器,如PCR仪、电泳仪等;
  3. 存在假阳性和假阴性

 

【规 格】: 20 Test/盒

【有效期】: 自检定合格之日起有效期为24个月

【贮 藏】: 避光,保存于-20℃

 

适用范围:本品为PCR法支原体检测试剂盒,供体外检测使用。通过检测可以

确认各种生物材料(如细胞培养物、实验动物分泌物及动物血清等)是否感染

或污染支原体。注:本试剂盒仅用于研究,不能用于临床诊断。

我们的产品优势:①能检测的支原体种类多:可检测牛源的莱氏无胆甾原体和精氨酸支原体,人源的口腔支原体和发酵支原体,猪源的猪鼻支原体等48种支原体;②特异性高,只扩增支原体DNA,真核细胞和细菌DNA不被扩增;③灵敏度高;④检测方便,3-4小时完成检测。

对比品牌

戴格生物

其他品牌

优势

可检测支原体种类

可检48种类型的支原体

可检11种支原体

降低支原体漏检风险

有效期

-20℃,自检定合格之 日起有效期为 24 个月

-20℃,6个月

超长有效期,减少浪费

灵敏度

可扩增pg级DNA片段

未明确

高灵敏度,更早期发现支原体污染

扩增方法

PCR

巢式PCR

比常规检测方法更快速便捷

有无tag酶

无需自备tag酶

检测时间

仅需一轮PCR,约1.5h

需要第二轮PCR来进一步排除干扰,约3h

更少的PCR次数,降低污染风险

 

戴格生物提供大量一抗、二抗、内参和标签抗体,覆盖病毒、细胞、外泌体、神经、表观等各个研究领域,帮助您的WB、ELISA、IHC、ICC/IF、IP等多个应用得到高质量结果,助力科学研究!

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